WODA PEPONOWA ALKALICZNA
Kod: CM1028
pożywka bulionowa do wzbogacania gatunków Vibrio z żywności, wody i próbek klinicznych
Typowa formuła * gm / litr
Pepton 10,0
Chlorek sodu 20,0
pH 8,6 ± 0,2 przy 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
Sposób użycia
Dodaj 30 g do 1 litra wody destylowanej. Dobrze wymieszaj, rozprowadź w końcowych pojemnikach i sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut.
Opis
Alkaline Peptone Water (CM1028) służy do wzbogacania gatunków Vibrio cholera i Vibrio z żywności, wody i próbek klinicznych. Bulion ten można również wykorzystać do bezpośredniego badania mikroskopowego próbek metodą wiszącej kropli.
Woda peptonowa alkaliczna została po raz pierwszy sformułowana przez Shread, Donovana i Lee1 do zastosowania jako nieselektywny bulion wzbogacający do hodowli Aeromonas spp. Cruickshank poinformował, że po podniesieniu pH pożywkę można wykorzystać do efektywnej hodowli gatunków Vibrio2. 2% (wag./obj.) Chlorek sodu włączony do tej pożywki sprzyja wzrostowi Vibrio cholerae, podczas gdy zasadowość tej pożywki hamuje większość niepożądanej flory tła.
Technika
Istnieją różne metody izolacji gatunków Vibrio z próbek środowiskowych, pokarmowych i klinicznych. Zazwyczaj obejmują one etap wstępnego wzbogacania, po którym następuje posiew na podłoże stałe oraz identyfikację morfologiczną, biochemiczną i serologiczną. Opisano wiele różnych mediów wzbogacania, ale spośród nich tylko woda z alkalicznym peptonem uzyskała szeroką akceptację. (Zapoznaj się z odpowiednimi wytycznymi lub standardami dotyczącymi receptur i dokładnej metodologii.)
Próbki kliniczne
Zaszczepić próbki wymazów bezpośrednio do alkalicznej wody peptonowej. Materiał, który nie jest hodowany bezpośrednio z wacika, można przenieść do pożywki za pomocą jałowej pętli mikrobiologicznej. W przypadku próbek kału przenieść aseptycznie około 1 g próbki do pożywki i dobrze wymieszać. Zaszczepione buliony są na ogół inkubowane w 35-37 ° C przez 5-6 godzin lub 18-20 godzin w 18-20 ° C3.
Próbki żywności i wody
Odwołaj się do odpowiedniej normy, takiej jak APHA4,5 FDA-BAM6 i ISO7.
W przypadku wszystkich metod podłoża do posiewów należy inkubować przez noc, a następnie sprawdzić pod kątem typowych kolonii:
Sodium Dodecyl Sulphate (SDS) Polimyksyna B Pożywka z sacharozy: Wibratory pozytywne dla sacharozy, takie jak Vibrio cholerae i Vibrio alginolyticus, mają żółty kolor. Gatunki ujemne dla sacharozy, takie jak Vibrio parahaemolyticus i Vibrio vulnificus, wytwarzają niebiesko-zielone kolonie. Organizmy produkujące sulfatazę np. Vibrio vulnificus są również zwykle otoczone aureolą opadów.
Cholera Medium TCBS (CM0333): Wibratory pozytywne dla sacharozy, takie jak Vibrio cholerae i Vibrio alginolyticus, mają kolor żółty na TCBS. Gatunki ujemne dla sacharozy, takie jak Vibrio parahaemolyticus i Vibrio vulnificus, wytwarzają niebiesko-zielone kolonie.
MacConkey Agar (CM0007): Gatunki Vibrio ujemne względem laktozy wytwarzają bezbarwne kolonie.
Potwierdzenie biochemiczne: Vibrio spp. są dodatnie pod względem oksydazy i fermentują glukozę tylko przy wytwarzaniu kwasu. Ponieważ testy na oksydazę mogą prowadzić do fałszywie ujemnych wyników na podłożach zawierających węglowodany (takie jak TCBS) subkultura do pożywki lub agaru z krwią przed badaniem.
Warunki przechowywania i okres ważności
Odwodnione podłoże należy przechowywać w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie.
Przechowywać przygotowane podłoże można przechowywać do 1 miesiąca w temperaturze pokojowej.
Wygląd
Medium odwodnione: słomy, sypki proszek
