PODSTAWA AGARÓW BACILLUS CEREUS
Kod: CM0617
Selektywne i diagnostyczne podłoże do izolacji i liczenia Bacillus cereus
Typowa formuła * gm / litr
Pepton 1.0
Mannitol 10,0
Chlorek sodu 2.0
Siarczan magnezu 0,1
Wodorofosforan disodowy 2.5
Dwuwodorofosforan potasu 0,25
Błękit bromotymolowy 0,12
Pirogronian sodu 10,0
Agar 15,0
pH 7,2 ± 0,2 w 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
SUPLEMENT POLYMYXIN B.
Sposób użycia
Zawiesić 20,5 g w 475 ml wody destylowanej i delikatnie doprowadzić do wrzenia, aby całkowicie się rozpuściły. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut. Ochłodzić do 50 ° C i aseptycznie dodać zawartość jednej fiolki suplementu polimyksyny B (SR0099) odtworzonej zgodnie z zaleceniami, a następnie dodać 25 ml jałowej emulsji żółtka jaja (SR0047). Dobrze wymieszaj i przelej do sterylnych szalek Petriego.
Opis
Bacillus Cereus Selective Agar, oparty na wysoce specyficznej diagnostycznej i selektywnej pożywce PEMBA, opracowanej przez Holbrook i Anderson1 do izolacji i oznaczania liczby Bacillus cereus w żywności. Spełnia wymagania dla podłoża, które jest wystarczająco selektywne, aby móc wykryć małą liczbę komórek Bacillus cereus i zarodników w obecności dużej liczby innych zanieczyszczeń żywności. Pożywka jest również wystarczająco diagnostyczna, że kolonie Bacillus cereus są łatwo identyfikowane i potwierdzane przez badanie mikroskopowe.
Rola Bacillus cereus w zatruciach pokarmowych, szczególnie w wyniku spożycia skażonego ryżu, jest obecnie dobrze udokumentowana2,3,4. Organizm bierze również udział w infekcjach oka5,6 oraz w wielu innych schorzeniach, w tym w powstawaniu ropnia, zapaleniu opon mózgowych, posocznicy i zakażeniu ran. Bacillus cereus jest rozpoznawany jako znaczący patogen w ranach pooperacyjnych i pourazowych pacjentów ortopedycznych7. Wśród weterynarzy Bacillus cereus jest znaną przyczyną chorób, zwłaszcza zapalenia sutka, u owiec i jałówek8.
W preparacie selektywnego agaru Bacillus cereus poziom peptonu 0,1% i dodatek pirogronianu sodu poprawiają precypitację żółtka jaja i zwiększają zarodnikowanie. Błękit bromotymolowy dodaje się jako wskaźnik pH w celu wykrycia wykorzystania mannitolu. Pożywka jest selektywna przez dodanie suplementu polimyksyny B (SR0099), który daje końcowe stężenie 100 IU polimyksyny B na ml podłoża. Polimyksyna B, jako selektywny środek do izolacji B. cereus, została wcześniej zasugerowana przez Donovan9 i uznana za zadowalającą przez Mossel10. Zaleca się, aby tam, gdzie spodziewana jest duża liczba grzybów w inokulum, cykloheksimid (SR0222) dodano do pożywki w końcowym stężeniu 40 mg / l.
Podstawowymi cechami diagnostycznymi pożywki są kolonialny wygląd, wytrącanie się zhydrolizowanej lecytyny oraz brak wykorzystania przez Bacillus cereus mannitolu. Typowe kolonie Bacillus cereus są krenowane, mają średnicę około 5 mm i mają charakterystyczny turkusowy lub pawi niebieski kolor otoczony dobrym osadem żółtka tego samego koloru. Te cechy odróżniają Bacillus cereus od innych Bacillus spp. z wyjątkiem Bacillus thuringiensis.
Inne organizmy reagujące na żółtko jaja, które mogą rosnąć na podłożu, w tym Staphylococcus aureus, Serratia marcescens i Proteus vulgaris, różnią się od Bacillus cereus formą i kolonią kolonii. Organizmy te wywołują także reakcję usuwania żółtka w przeciwieństwie do osadu żółtka wytwarzanego przez Bacillus cereus.
Badanie mikroskopowe na obecność kuleczek lipidowych w komórkach wegetatywnych jest zalecane jako szybki i potwierdzający test na Bacillus cereus i zastępuje potrzebę badań biochemicznych. Holbrook i Anderson1 potwierdzili, że tylko Bacillus cereus z Bacillus spp. są zdolne do posiadania kuleczek lipidowych w komórkach wegetatywnych, gdy są hodowane na pożywce selektywnej. Kolejną zaletą tego testu jest to, że można wykryć i potwierdzić szczepy Bacillus cereus, które reagują tylko słabo lub wcale z żółtkiem jaja.
Technika
Homogenizuj 10 g próbki żywności przez 30 sekund w 90 ml 0,1% wody peptonowej CM0009 przy użyciu Stomacher 40011. Suszone produkty spożywcze należy najpierw uwodnić, mocząc 20 g w 90 ml roztworu soli tryptonu † przez 50 minut w temperaturze pokojowej. Dodać kolejne 90 ml 0,1% wody peptonowej, aby uzyskać końcowe rozcieńczenie 10-1. Homogenizuj przez 30 sekund za pomocą Stomacher 400.
Dalsze rozcieńczenia homogenatu należy wykonać w 0,1% wodzie peptonowej.
Zaszczepić 0,1 ml 10-1 i wyższych rozcieńczeń na powierzchni podłoża.
Inkubować płytki w 37 ° C przez 24 godziny.
Zbadaj typowe kolonie Bacillus cereus.
Jeśli nie zaobserwowano początkowych kolonii po 24 godzinach, ponownie inkubuj płytki przez kolejne 24 godziny w 37 ° C.
Potwierdź domniemaną identyfikację Bacillus cereus za pomocą procedury szybkiego barwienia potwierdzającego.
Podać wyniki jako liczbę kolonii Bacillus cereus na gram w
