PODSTAWA AGAR BAIRD-PARKER (ISO)
Kod: CM1127
Agar Bairda-Parkera (ISO) jest wybiórczym i diagnostycznym podłożem do izolacji i oznaczania liczby gronkowców koagulazo-dodatnich w żywności. W przypadku stosowania z tellurynem żółtka jaja podłoże to spełnia kryteria składu i działania opisane w ISO 6888 części 1 i 31,2 oraz ISO 11133: 20143.
Typowa formuła * gm / litr
Trzustkowe trawienie kazeiny 10.0
Ekstrakt mięsny 5.0
Ekstrakt drożdżowy 1.0
Pirogronian sodu 10.0
L-glicyna 12,0
Chlorek litu 5.0
Agar 20,0
pH 7,2 † ± 0,2 @ 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
† pH suplementowanej pożywki
Sposób użycia
Zawiesić 63 g bazy Baird-Parker Agar (ISO) w 1000 ml wody destylowanej. Gotować w celu rozpuszczenia pożywki i sterylizacji w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut. Ochłodzić do 47 ° C i aseptycznie dodać 50 ml emulsji Tellurite z żółtka jaja (SR0054). Dobrze wymieszaj i przelej do sterylnych szalek Petriego.
Opis (uzupełniony średni)
Baird-Parker4 opracował tę pożywkę agarową z preparatu telluryt-glicyna Zebovitza i in. 5 i poprawił jej niezawodność w izolowaniu gronkowców koagulazo-dodatnich od żywności. Baird-Parker dodał emulsję żółtka jaja jako środek diagnostyczny i pirogronian sodu, aby chronić uszkodzone komórki i wspomóc ich regenerację6. Jest obecnie szeroko zalecany przez krajowe i międzynarodowe organy do izolacji gronkowców koagulazo-dodatnich7 i jest uwzględniony w Mikrobiologii żywności i pasz dla zwierząt - Horyzontalna metoda zliczania gronkowców koagulazo-dodatnich (Staphylococcus aureus i innych gatunków) ISO 6888- 1: 1 i ISO 6888-3: Wykrywanie i technika MPN dla niskich liczb2.
Środki selektywne; glicyna, lit i telluryt zostały starannie zbilansowane, aby zahamować wzrost większości bakterii obecnych w żywności, nie hamując gronkowców koagulazo-dodatnich. Emulsja żółtka sprawia, że średni kremowy / żółty i nieprzejrzysty. Gronkowce koagulazo-dodatnie redukują telluryt, tworząc czarne / szare błyszczące kolonie, które po 48 godzinach wytwarzają wyraźne strefy wokół kolonii spowodowane proteolizą żółtka jaja. Ta czysta strefa z typową czarną / szarą kolonią jest diagnostyczna dla gronkowców koagulazo-dodatnich. Po dalszej inkubacji większość szczepów gronkowców koagulazo-dodatnich tworzy nieprzezroczyste halo wokół kolonii; uważa się, że jest to spowodowane działaniem lipazy. Nie wszystkie szczepy gronkowców koagulazo-dodatnich wywołują obie reakcje.
Niektóre szczepy gronkowca koagulazo-ujemnego Staphylococcus saprophyticus wytwarzają zarówno czyste strefy, jak i nieprzezroczyste aureole, ale doświadczeni pracownicy mogą je odróżnić od innych organizmów przez wymagany dłuższy czas inkubacji8. Niektóre pokarmy, zwłaszcza sery, mogą wytwarzać typowe czarne / szare kolonie gronkowców koagulazo-dodatnich, ale bez typowej reakcji żółtka jaja. Można to potwierdzić, wykonując test krzepnięcia rurki9.
Baird-Parker i Davenport10 wykazali, że odzysk uszkodzonych gronkowców był większy na Baird-Parker Agar niż na innych testowanych nośnikach do odzyskiwania. Broeke11 i de Waart i wsp. 12 stwierdzili, że agar Bairda-Parkera jest cenny w badaniach ekologicznych nad żywnością obciążoną staphyloenterotoksykozą. Spośród 522 testowanych szczepów Staphylococcus aureus, izolowanych od ludzi i żywności, 97,5% rozwinęło charakterystyczne kolonie na agarze Baird-Parker.
Technika
Szczegółowe instrukcje znajdują się w odpowiedniej standardowej metodzie. Poniższa metoda jest streszczeniem ISO 6888-1: 19991:
Przygotuj próbki zgodnie z ISO 688713 lub odpowiednią normą
Rozprowadź 0,1 ml porcji rozcieńczeń żywności przygotowanych w odpowiednim rozcieńczalniku, takim jak buforowana woda peptonowa (CM1049), aż do wchłonięcia. Do większych naczyń można użyć do 1,0 ml
Inkubować odwrócone naczynia w temperaturze 35 ° C lub 37 ° C. Zbadaj po 24 ± 2 godzinach i poszukaj typowych kolonii gronkowców koagulazo-dodatnich
Ponownie inkubuj płytki ujemne przez kolejne 24 godziny ± 2 godziny
Aby uzyskać wyniki ilościowe, policz przypuszczalne koagulazo-dodatnie kolonie gronkowców i potwierdź koagulazą probówkową (R21052, R21060), Staphylase (DR0595) lub Staphytect Plus (DR0850)
Podać wyniki gronkowców koagulazo-dodatnich na gram jedzenia.
Warunki przechowywania i okres ważności
Przechowywać odwodnione podłoże w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie.
Przygotowane podłoże najlepiej stosować świeżo przygotowane, ale może być odpowiednie do dłuższego przechowywania po wewnętrznej weryfikacji.
Wygląd
Odwodniona pożywka hodowlana: sypki proszek w kolorze słomy
Przygotowane podłoże: kremowy / żółty, nieprzezroczysty żel
