BRILLIANT GREEN AGAR (MODYFIKOWANY)
Kod: CM0329
Selektywny i diagnostyczny agar dla salmonelli (innej niż Salmonella typhi) z pożywienia i pasz.
Typowa formuła *gm / litr
Proszek „Lab-Lemco” 5.0
Pepton 10,0
Ekstrakt drożdżowy 3.0
Wodorofosforan disodowy 1.0
Diwodorofosforan sodu 0,6
Laktoza 10,0
Sacharoza 10,0
Czerwony fenol 0,09
Brilliant Green 0,0047
Agar 12,0
pH 6,9 ± 0,2 w 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
Sposób użycia
Zawiesić 52 g w 1 litrze wody destylowanej. Ogrzewać delikatnie od czasu do czasu mieszając i doprowadzić do wrzenia, aby całkowicie rozpuścić medium. NIE AUTOCLAVE. Ochłodzić do 50 ° C, dobrze wymieszać i wlać płytki.
Sposób użycia
Odtworzyć jedną fiolkę zgodnie z zaleceniami, aseptycznie dodać zawartość do 500 ml jałowego agaru Oxoid Brilliant Green (zmodyfikowanego) ochłodzonego do 50–55 ° C. Delikatnie wymieszaj i przelej do sterylnych szalek Petriego.
Opis
Genialny zielony agar (zmodyfikowany) opracowano na podstawie wzoru dostarczonego przez Rijks Instituut voor de Volksgezondheid (National Institute for Public Health), Utrecht1,2.
Medium zostało szeroko ocenione w Europie i zostało zastosowane w normach ISO3,4,5.
Zaletami stwierdzonymi dla pożywki są większe hamowanie gatunków Escherichia coli i Proteus niż w przypadku innych preparatów: ograniczenie wzrostu gatunków Pseudomonas, których kolonie mogą przypominać salmonellę na Brilliant Green Agar i powodować zamieszanie lub wiele dodatkowych prac w celu potwierdzenia ich tożsamości: brak właściwości hamujących w stosunku do niewielkiej liczby salmonelli6.
SELEKTYWNY BRYLANTOWY ZIELONY AGAR (ZMODYFIKOWANY)
Watson i Walker7 wprowadzili kombinację sulfacetamidu (1,0 mg / ml) i kwasu migdałowego (w ilości 0,25 mg / ml) do Oxoid Brilliant Green Agar (Zmodyfikowany), aby uzyskać maksymalne odzyskiwanie salmonelli z bulionu tetrationianowego Mullera-Kauffmanna przy jednoczesnym maksymalnym zahamowaniu zanieczyszczenia organizmy.
Suplement Oxygen Salmonella Sulpha-Mandelate, SR0087 stosowany do izolacji i liczenia salmonelli ze ścieków i osadów ściekowych, oparty jest na sformułowaniu Watson i Walker7. Autorzy ci wykazali, że zastosowanie Brilliant Green Agar (zmodyfikowanego) zawierającego kombinację sulfacetamidu i kwasu migdałowego inkubowanych w 43 ° C skutkowało maksymalnym odzyskiem salmonelli z bulionu tetrationianowego Muller-Kauffmann.
Wykazano, że metoda opisana7 jest szybką i niezawodną techniką izolacji subtraktalnie uszkodzonych salmonelli z oczyszczonych ścieków i osadów ściekowych.
Zastosowanie brylantowego zielonego agaru z dodatkiem antybiotyku jest konieczne, ponieważ wstępne wzbogacenie ścieków w wodzie peptonowej buforowanej fosforanem (PBP) pobudzi nie tylko wzrost stresujących salmonelli, ale wielu konkurujących organizmów.
Hamujące właściwości bulionu tetrationianowego Mullera-Kauffmanna same w sobie nie są wystarczające do zahamowania wzrostu tego ostatniego. Zaletą selektywnego genialnego zielonego agaru jest większe hamowanie organizmów zanieczyszczających i mniejsza częstość występowania fałszywie dodatnich wyników.
Ta korzyść została potwierdzona przez Frickera i jego współpracowników, gdy zastosowano Brilliant Green Agar (zmodyfikowany) zawierający sulfacetamid sodu i migdalan sodu do posiewu kultur wzbogacania w bulionie Rappaport, ze ścieków i wody zanieczyszczonej ściekami8,11, kału mew 9 i kurczaka10,12.
Vassilliadis i wsp. 13 dodali 2,5 g dezoksycholanu sodu do jednego litra Brilliant Green Agar (zmodyfikowanego), aby zapobiec rojowi się przez Proteus hauseri, podczas badania ścieków. Okazało się, że desoksycholan jest lepszy od sulfonamidów w tłumieniu roju bez wpływu na wzrost szerokiej gamy serotypów salmonelli.
Proteus Prawie całkowicie zahamowane, te kolonie, które rosną, produkują czerwone kolonie bez roju
Pseudomonas Hamował wzrost małych, crenowanych czerwonych kolonii
Techniki
Technika żywności i pasz
Zarys metody zastosowanej przez Edela i Kampelmachera2 w ich próbach jest następujący:
1. Jedną część próbki żywności dodano do 20 części podłoża tetrationianowego Muller-Kauffmann CM0343.
2. Po wymieszaniu kolbę bulionu umieszczono w łaźni wodnej o temperaturze 45 ° C tylko na 15 minut.
3. Kolbę przeniesiono następnie do inkubatora w 43 ° C.
4. Bulion poddano subkulturze do Brilliant Green Agar (zmodyfikowanego) po 18 i 48 godzinach.
Pojedynczą pętlę bulionu zastosowano do posiewu zaszczepiającego albo dwie płytki o średnicy 9 cm (bez ponownego ładowania pętli między płytkami) lub jedną płytkę o średnicy 14 cm.
5. Płytki inkubowano w 35 ° C przez 18-24 godzin.
6. Czerwone kolonie, przypominające salmonellę, zebrano z płytek i hodowano do bulionu dekarboksylazy lizyny CM0308 i potrójnego cukru Iron
