PODSTAWA AGAROWA BRILLIANCE LISTERIA
Kod: CM1080
Brilliance ™ Listeria Agar (wcześniej Oxoid Chromogenic Listeria Agar (OCLA)) jest podłożem do izolacji, liczenia i przypuszczalnej identyfikacji gatunków Listeria i Listeria monocytogenes z próbek żywności.
Typowa formuła * gm / litr
Pepton 18,5
Ekstrakt drożdżowy 4.0
Chlorek sodu 9.5
Pirogronian sodu 2.0
Chlorek litu 15,0
Maltoza 4.0
Chromogenna mieszanka X-glukozydowa 0.2
Agar 14,0
pH 7,2 ± 0,2 w 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
Brilliance Listeria Agar to pożywka izolacyjna stosowana w metodzie szybkiej hodowli Oxoid Listeria Precis ™. Aby uzyskać więcej informacji, wystarczy pobrać arkusz danych Brilliance Listeria Agar (946 KB) lub arkusz danych Listeria Precis (680 KB) w formacie PDF.
Sposób użycia
Zawiesić 33,6 g Brilliance Listeria Agar Base (CM1080) w 480 ml wody destylowanej. Dobrze wymieszaj i sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut. Schłodzić pożywkę do 46 ° C i dodać jedną fiolkę Brilliance Listeria Selective Supplement, odtworzoną zgodnie z zaleceniami i jedną fiolkę Brilliance Listeria Differential Supplement. Dobrze wymieszaj i przelej do sterylnych szalek Petriego.
Opis
Listeria monocytogenes jest najczęstszą patogenną Listeria spp. i wykazano, że jest patogenny zarówno dla ludzi, jak i zwierząt. Niektóre szczepy Listeria ivanovii mają również aktywność lecytynazy i chociaż Listeria ivanovii są przede wszystkim patogenne dla zwierząt, istnieją szczepy, które jak się okazało, powodują zakażenie u ludzi3. Badania wykazały, że ta pożywka jest lepsza od PALCAM lub pożywki Oxford do izolacji Listeria monocytogenes4.
Brilliance Listeria Agar wykorzystuje chromogen X-glukozyd do przypuszczalnej identyfikacji Listeria spp. Ten chromogen jest trawiony przez ß-glukozydazę, która jest wspólna dla wszystkich gatunków Listeria. Inne organizmy posiadające ten enzym, takie jak enterokoki, są hamowane przez czynniki selektywne w pożywce; chlorek litu, polimyksyna B i kwas nalidyksowy, podczas gdy amfoterycyna hamuje wzrost wszelkich drożdży i pleśni obecnych w próbce. Listeria monocytogenes i patogenna Listeria ivanovii są następnie dalej różnicowane przez ich zdolność do wytwarzania enzymu fosfolipazy, lecytynazy. Enzym ten hydrolizuje lecytynę w pożywce, tworząc nieprzezroczyste białe halo wokół kolonii.
Brilliance Listeria Agar jest modyfikacją formuły opisanej przez Ottaviani i Agosti2. Podobnie jak w oryginalnym preparacie, podłoże jest zaprojektowane do identyfikacji Listeria spp. na podstawie ich wykorzystania chromogennego substratu. Jednak w tej modyfikacji patogenny Listeria spp. są następnie dalej różnicowane przez wykrywanie aktywności lecytynazy (fosfatydylocholino-fosfolipazy C (PCPLC) zamiast aktywności fosfolidylinozytolowej fosfolipazy C (PIPLC). Oba enzymy, PCPLC i PIPLC, są związane z wirulencją w Listeria spp., a zatem z obecnością któregokolwiek z enzymów jest użytecznym wskaźnikiem chorobotwórczości.
Technika
Agar Brilliance Listeria można stosować zgodnie z różnymi procedurami wzbogacania, tj. ISO, NMKL, BAM itp. Poniżej przedstawiono sugerowany protokół z użyciem JEDNEJ Bulionu-Listerii. Ta metoda została zatwierdzona przez AFNOR i wykazano, że daje równoważne wyniki z ISO 11290-1: 19971,5.
Dodaj 25 g próbki żywności do 225 ml ONE Broth-Listeria (CM1066 i SR0234) i żołądka przez co najmniej 30 sekund, aby wymieszać próbkę.
Inkubuj bulion bez mieszania w 30ºC przez 24 ± 2 godziny.
Następnie delikatnie wstrząśnij torebkę, używając pętli mikrobiologicznej, usuń 10 µl i zaszczep na płytce Brilliance Listeria Agar i inkubuj w 37 ° C przez 24 ± 2 godziny. Zbadaj płytkę pod kątem niebieskich kolonii z nieprzezroczystymi białymi aureolami i bez nich.
Podczas testowania próbek mięsa inkubuj płytki ujemne przez kolejne 24 ± 2 godziny i ponownie zbadaj.
Potwierdź przypuszczalne kolonie na płytce agarowej jako Listeria monocytogenes lub gatunki Listeria za pomocą odpowiednich metod, np. Barwienie metodą Grama, katalaza, Oxoid O.B.I.S. mono ID0600M, zestaw testowy do lateksu Oxoid Listeria DR1126A, Microbact Listeria 12L MB1128A.
Warunki przechowywania i trwałość
Odwodnione podłoże należy przechowywać w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie.
Przygotowaną pożywkę można przechowywać do 2 tygodni w temperaturze 2–8 ° C.
Wygląd:
Medium odwodnione: słomy, sypki proszek
Przygotowane podłoże: półprzezroczysty, biały żel
