AGAR LISTERII CHROMOGENICZNEJ (ISO)
Kod: CM1084
podłoże do izolacji, zliczania i domniemanej identyfikacji gatunków Listeria i Listeria monocytogenes z próbek żywności
Typowa formuła * gm / litr
Enzymatyczne trawienie tkanek zwierzęcych 18,0
Enzymatyczne trawienie kazeiny 6.0
Pirogronian sodu 2.0
Glukoza 2.0
Glicerofosforan magnezu 1.0
Siarczan magnezu (bezwodny) 0,5
Chlorek sodu 5.0
Ekstrakt drożdżowy 10,0
Chlorek litu 10,0
Wodorofosforan disodowy (bezwodny) 2.5
Chromogenna mieszanka X-glukozydowa 0,05
Agar 12,0
Końcowe pH 7,2 ± 0,2 przy 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
Należy stosować suplement różnicowy OCLA (ISO) (SR0244) lub suplement różnicowy Brilliance Listeria (SR0228), zgodnie z zastosowaną metodą
Sposób użycia
Zmodyfikowana formuła ISO
Zawiesić 34,5 g chromogennego agaru Listeria (ISO) w 480 ml wody destylowanej. Dobrze wymieszaj i sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut. Schłodzić pożywkę do 46 ° C i dodać jedną fiolkę Chromogenic Listeria Selective Supplement (ISO), odtworzoną zgodnie z zaleceniami i jedną fiolkę Brilliance Listeria Differential Supplement. Dobrze wymieszaj i przelej do sterylnych szalek Petriego.
Formulacja ISO
Zawiesić 34,5 g Chromogenic Listeria Agar (ISO) Base w 480 ml wody destylowanej. Dobrze wymieszaj i sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut. Schłodzić podłoże do około 50ºC i dodać jedną fiolkę Chromogenic Listeria Selective Supplement (ISO), ponownie zawieszoną zgodnie z zaleceniami i jedną fiolkę OCLA (ISO) Suplement różnicowy. Dobrze wymieszaj i przelej do sterylnych szalek Petriego.
Opis
Listeria monocytogenes jest najczęstszą patogenną Listeria spp. i wykazano, że jest patogenny zarówno dla ludzi, jak i zwierząt. Niektóre szczepy Listeria ivanovii również posiadają te enzymy i chociaż Listeria ivanovii są przede wszystkim patogenne dla zwierząt, istnieją szczepy, które jak się okazało, powodują zakażenie u ludzi2. Badania wykazały, że ta pożywka jest lepsza od PALCAM i pożywki Oxford do izolacji Listeria monocytogenes3.
OCLA (ISO) używa chromogenu X-glukozyd do domniemanej identyfikacji Listeria spp. Ten chromogen jest trawiony przez ß-glukozydazę, która jest wspólna dla wszystkich gatunków Listeria. Inne organizmy posiadające ten enzym, takie jak enterokoki, są hamowane przez czynniki selektywne w pożywce: chlorek litu, polimyksyna B i kwas nalidyksowy, podczas gdy amfoterycyna hamuje wzrost drożdży i pleśni, które mogą być obecne w próbce. Listeria monocytogenes i patogenna Listeria ivanovii są następnie dalej różnicowane pod względem ich zdolności do wytwarzania enzymów fosfolipazy PIPLC i PCPLC, które hydrolizują fosfatydyloositol lub letycynę w pożywce, tworząc nieprzezroczyste białe halo wokół kolonii.
To podłoże jest przeznaczone do identyfikacji Listeria spp. na podstawie ich wykorzystania chromogennego substratu. Baza OCLA (ISO), w przypadku stosowania z selektywnym suplementem OCLA (ISO) (SR0226) i suplementem różnicowym OCLA (ISO) (SR0244) zgodnie z instrukcjami producenta, jest zgodna z recepturą opisaną przez Ottaviani i Agosti (ALOA) w ISO 11290-1 : 1997 (Włączenie poprawki nr 1) 1. Ten preparat ALOA zawiera fosfatydyloinozytol, dzięki czemu wykrywana jest fosfolipaza fosfolipazy C (PIPLC), wytwarzana przez Listeria monocytogenes. Alternatywnie, dodanie lecytyny (Brilliance Listeria Differential Supplement (SR0228)) zamiast fosfatydyloinozytolu oznacza, że można wykryć aktywność fosfolipazy C fosfatydylocholiny (PCPLC). Zarówno PIPLC, jak i PCPLC są związane z wirulencją Listerii, a zatem wykrycie któregokolwiek z enzymów jest użytecznym wskaźnikiem patogenności.
Technika
Chromogenny agar Listeria (ISO) można stosować zgodnie z różnymi procedurami wzbogacania, tj. ISO, NMKL, FDA, AFNOR (UNI 03/04 - 04/054) itp.
Poniższa metoda stanowi streszczenie normy ISO 11290-1: 1997 (zawierająca poprawkę nr 1):
Dodaj 25 g próbki żywności do 225 ml bulionu Half Fraser CM0895 i SR0166 i żołądka przez co najmniej 30 sekund, aby wymieszać próbkę.
Inkubuj bulion bez mieszania w 30ºC przez 24 ± 3 godziny.
Następnie delikatnie wstrząśnij worek za pomocą pętli mikrobiologicznej zaszczepiając Chromogenic Listeria Agar (zgodnie z Ottaviani i Agosti) i drugą selektywną pożywką (np. PALCAM Agar - CM0877 i SR0150). Inkubować w 37 ° C przez 24 godziny ± 3 godziny, a jeśli to konieczne przez dodatkowe 24 godziny ± 3 godziny (agar PALCAM należy inkubować w warunkach mikro-tlenowych, aby uzyskać najlepsze wyniki).
Zbadaj PALCAM
